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转染实验?

促天科技 2024-08-27 14:03 0 0条评论

一、转染实验?

细胞转染实验:

目的:学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观 测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。

原理:外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。

二、转染方法?

细胞转染

将外源分导入真核细胞的技术

细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛

转染,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

理想细脂质体转染法

阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电电穿孔转染法

电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,可以大大的降低细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率。

三、什么是转染?为什么要质粒转染?

转染(transfection):指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。

转染目的:研究你的目的片段到细胞内的表达。

转染一般是将目的基因构建到某个载体,将构建好的重组质粒导入细胞中,这样就能表达你所要的目的蛋白用于后续实验。

四、质粒转染原理?

质粒转染的原理是利用质粒将外源DNA片段转染到宿主细胞中,从而实现基因的转染。质粒是一种由DNA组成的病毒,它可以将外源DNA片段转染到宿主细胞中。当质粒感染宿主细胞时,其DNA片段会被宿主细胞吞噬,然后被宿主细胞的DNA复制机制复制,从而将外源DNA片段转染到宿主细胞中。

五、共转染和转染有什么区别?

共转染是总共转染的,转染是指个别的

六、转染效率如何计算?

sirna转染效率=sirna实际转染量÷sirna计划转染量

七、pei转染法原理?

由于PEI 带正电荷,与带负电荷的DNA 结合形成带正电荷的 PEI-DNA 复合物,可以与带负电荷的细胞表面结合。

PEI-DNA 复合物通过胞吞作用进入细胞内部形成内涵体,之后一部分从内涵体中逃逸进入细胞核内,未逃逸的进入溶酶体被降解,无法入核的 DNA 会在 100 min 内被胞浆中的 DNA 酶降解

八、质粒转染和病毒转染有什么本质上的区别?

两者在本质上并没有区别。无论是质粒转染,还是病毒转染,均是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。

随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。

在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。

随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。

电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。扩展资料:转染的原理:外源基因进入细胞主要包括电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。

电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。

但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。

利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。

九、什么是共转染?

表达一个DNA分子上的基因标记的细胞经常也表达另一个DNA分子携带的基因标记,这种物理上不相连的基因被整合到同一整合序列并在同一转染细胞内表达的现象叫做共转染

将一种体外的基因片段加在细胞核内DNA上,让其能表达。而转染则是将一种体外基因加在细胞质中,容易丢失。

十、转染前为什么铺板?

你的问题好难回答。因为问题实在是太不准确了。首先你所用的转染方法是什么?姑且认为是脂质体吧。其次,你用于转染的细胞种类是什么? 如果是悬浮细胞,可以直接分了细胞直接转。如果是贴壁细胞取决于细胞的种类。说说我的经验吧,以293T为例,我发现当细胞贴壁时间小于12小时,转染效率会大大降低。估计是细胞没有完全贴壁,转染过程对细胞毒性太大,导致被转的细胞大多数挂掉了。二对于其他一些很强的癌细胞,哈哈哈,不贴壁转染效果更佳。之所以大部分在24小时内转染,是为了能在细胞过密之前收取RNA或蛋白。

看了你是刚入此门,实验做多了你就发现,很多都是需要自己尝试,然后确定最佳实验条件。当然认真阅读protocol和paper也是实验成果的必要条件。